ELISA直接法测长叶车前花叶病毒（RMV）含量实验步骤

1.       将不同浓度的待检测RMV溶液作为样品液，在测定板每孔各加250ul,至冰箱（4℃）中孵育过夜。

2.       孵育后，去除孔穴内抗原溶液，用PBS-Tween20溶液缓缓冲洗孔穴3次，每次3min，然后去净洗涤液。

3.       每孔穴加250ulRMV的酶标记抗体溶液（用1%牛血清白蛋白的PBS- ween20稀释）在恒温箱（37℃）里孵育3-6h,或6℃下过夜。

4.       去除孔穴酶标记抗体溶液，用PBS-Tween20溶液缓缓冲洗3次每次3min，然后去净洗涤液。

5.       每孔穴加入新鲜配备的底物溶液250ul,室温放置0.5h，或者放置出现黄色。

6.       加入50ul3N NaOH，终止反应。

7.       对每孔穴的黄色溶液，测定449nm波长处的吸光值。

讨论

1.       如该聚苯乙烯塑料微量反应板*次使用，应分别用标准浓度的RMV溶液、RMV的抗血清及RMV与它的IgG形成的免疫结合物，进行期盼滴定法来测该聚苯乙烯塑料微量反应板对RMV抗原和它的抗体的吸附能力。

2.       在正式测样品前，用0.1mol/L pH9.6碳酸盐缓冲液配置各种标准浓度的RMV溶液，依照实验步骤测定RMV各种标准浓度的A449nm值，以病毒标准浓度为横坐标，A449nm值为纵坐标绘制标准曲线，由此可以测出RMV包被的浓度。

3.       测出原始底物的吸光值，以便核准数据。

4.       对照标准曲线，就可算出样品液中RMV的含量。

5.       如无牛血清白蛋白，可用0.1%白明胶代替。

6.       对于不稳定的病毒，用中性缓冲液稀释。

7.       如有ELISA测定仪，可快速测定。

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