斑点ELISA法

斑点酶联免疫吸附试验（Dot-ELISA）又称点免疫结合法（Dot-immunobinding）或抗原斑点试验（Antigen spot test,AST）,为Hawkes等参照核酶的斑点杂交法改良而成，是以纤维素膜为载体的一种新型免疫检测技术【6】。据报道，其敏感性及特异性高于或相当于常规ELISA及放射免疫测定，已被广泛应用于免疫印渍（Immunobloting）单克隆抗体鉴定及各种抗原-抗体体系的检测。

Dot-ELISA以纤维素膜代替常规ELISA中常用的聚苯乙烯酶标板，这种微孔滤膜对样品吸附量大，且包被牢固，所以样品用量少，试验结果可通过颜色斑点的出现与否和色泽进行判定，不需特殊仪器。常规ELISA中的直接法、间接法、夹心法等均适合用于Dot-ELISA.其试验程序与常规ELISA相似，加抗原或抗体与膜上，封闭、洗涤，然后加入其他试剂进行免疫反应、底物显色反应，zui后肉眼观察出现斑点情况做出判断。在现有的Dot-ELISA试验研究中，有的是将抗原（抗体）包被好的膜或在包被之前用圆形打孔器压迹或用笔画成几毫米的小方块，包被、封闭之后剪开，分别放入聚苯乙烯酶标板的小孔中，然后再加各种试剂，有的采用完整膜的形式，预先在膜上画格并做好标记。包被之后，将膜放入湿盒或平皿中，加入各种试剂或者直接将包被好的膜浸入到各种试剂中反应。包被、封闭好的膜可在4℃保持一段时间。Dot-ELISA简便、快速、经济、敏感、特异的特点深受人们欢迎，从而得到广泛应用。

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