SDS-PAGE浓缩胶缓冲液（4×）说明书

Stacking Gel Solution (4×)

目录号：K0025

保存条件：2-8℃保存。

组分说明

                      Cat No.       K0025A

                      Volume          200 ml

             本产品仅供科研使用，请勿用于临床诊断及其他用途  

产品简介

　　本产品为配制 SDS-PAGE浓缩胶缓冲液，可用于配制各种浓度的变性及非变性

PAGE凝胶，方便、快捷。产品中已加入10%SDS,使用时不用另外加入。

操作步骤

根据目的蛋白分子量大小选择合适的PAGE分离胶配制浓度，jia胶浓度请参考附表1。

 I 灌制分离胶（各试剂使用量请参考附表2）

1．参照凝胶模具说明书，装配好凝胶模具。

   注：加入上层筛板有助于加样时保持填料与样品均匀接触，是否加入上层筛板可根据实际情况选择。

2．将不同体积的30%Acr-Bis(29:1)、分离胶缓冲液和双蒸水在小烧杯或试管中混合。

3．加入10%APS和TEMED，轻轻搅拌使其混匀，避免产生气泡。

4．在凝胶模具中灌入适量分离胶溶液（对于 mini-gel，凝胶液加至约距前玻璃板顶端

   1.5 cm或距梳齿约0.5 cm即可），然后在分离胶溶液上轻轻覆盖一层1-5 cm的水层，

   使凝胶表面保持平整。

5．静置30-60分钟，待分离胶和水层之间出现一个清晰的界面后，表面凝胶已聚合。

II灌制浓缩胶（各试剂使用量请参考附表3）

1．去除覆盖在分离胶上的水层。

2．将不同体积的30%Acr-Bis(29:1)、浓缩胶缓冲液和双蒸水在一个小烧杯或试管中混合。

3．加入10%过硫酸铵和TEMED，轻轻搅拌使其混匀，避免产生气泡。

4．将浓缩胶溶液加至分离胶的上面，直至凝胶溶液到达前玻璃板的顶端。

5．将梳子插入凝胶内，避免产生气泡。

6．静置10~20分钟，等待浓缩胶聚合。

7．待凝胶聚合后，小心地拔出梳子，以免破坏加样孔。

8．进行常规电泳操作。

 附表

                 附表1. SDS-PAGE分离胶的浓度与jia分离范围

                     SDS-PAGE分离胶浓度  jia分离范围

                               6%胶                         50-150 kD

                               8%胶                          30-90 kD

                              10%胶                          20-80 kD

                              12%胶                          12-60 kD

                              15%胶                          10-40 kD

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