2×GoldStar Best MasterMix（含染料）说明书
目录号：K0655
保存条件：-20℃长期保存，如需频繁使用，可存放于2-8℃，尽量避免反复冻融。
组分说明
Cat. No. K0655 K0655B
Kit Size 1 ml 5×1 ml
2×GoldStar Best MasterMix 1 ml 5×1 ml
RNase-Free Water 1 ml 5×1 ml
注意：2×GoldStar Best MasterMix含有GoldStar Best DNAPolymerase,
2×GoldStar Best PCR Buffer, 3 mM MgCl2和400 µM dNTPs。
产品简介
本品为由GoldStar Best DNA Polymerase、PCR Buffer、Mg、dNTPs以及PCR
稳定剂和增强剂组成的预混体系，浓度为 2×，具有操作简便快速、灵敏度高、特异性2+
强、稳定性好的优点，可大限度地减少人为误差和污染。该产品所含的GoldStar
Best DNA Polymerase是经过特殊处理的热启动高保真聚合酶。该聚合酶具有5′-3′DNA
聚合酶活性， 5′-3′核酸外切酶活性和 3′-5′核酸外切酶活性，在普通 PCR条件下，与GoldStar Taq DNA Polymerase相比，具有扩增效率高、错配率低的优良性能。化学修
饰使该酶在常温下没有聚合酶活性，有效避免在常温条件下由引物和模板非特异性结
合或引物二聚体而产生的非特异性扩增，酶的激活须在 95℃下孵育10分钟，该条件可
以整合入已有的PCR热循环程序。优化的缓冲体系使酶的作用发挥大功效，实现对
目的片段的高保真、高特异性、高扩增效率、高灵敏度扩增。本产品已加入染料（蓝
色），反应结束后可直接进行电泳检测，无需再使用上样缓冲液。扩增得到的 PCR产
物3′端附有一个“A”碱基，因此可直接用于T/A克隆。适用于常规的PCR反应和对高保真性有要求的基因克隆等实验。
质量控制
经检验无外源核酸酶活性； PCR方法检测无宿主残余DNA；能有效地扩增多种基
因组中的单拷贝基因；2-8℃存放三个月，活性无明显改变。
本产品仅供科研使用，请勿用于临床诊断及其他用途
使用方法
以下举例为常规PCR反应体系和反应条件，实际操作中应根据模板、引物结构和目的
片段大小不同进行相应的改进和优化。
1. PCR反应体系
试剂 50 μl反应体系 终浓度
2×GoldStar Best MasterMix 25 μl 1×
Forward Primer，10 µM 2 μl 0.4 μM
Reverse Primer，10 µM 2 μl 0.4 μM
Template DNA <1 μg <1 μg/reaction
RNase-Free Water up to 50 μl
注意：引物浓度请以终浓度0.1-1.0 μM作为设定范围的参考。扩增效率不高的情况下，可提高引物的浓度；发生非特异性反应时，可降低引物浓度，由此优化反应体系。
2. PCR反应条件
步骤 温度 时间
预变性 95℃ 10 min
变性 94℃ 30 s
退火 55-65℃ 30 s 30-40个循环
延伸 72℃ 60 s
终延伸 72℃ 5 min
注意：1）一般实验中退火温度比扩增引物的熔解温度Tm低5℃，无法得到理想的扩增效率时，适当降低退火温度；发生非特异性反应时，提高退火温度，由此优化反应条件。
2）延伸时间应根据所扩增片段大小设定，本产品中所包含的GoldStar Best DNA Polymerase的扩增效率为1 kb/min。
3）可根据扩增产物的下游应用设定循环数。如果循环次数太少，扩增量不足；如果循环次数太多，错配机率会增加，非特异性背景严重。所以在保证产物得率的前提下应尽量减少循环次数。
4）本产品须在预变性95℃，10 min条件下实现酶的活化。
3.结果检测：本产品已加入染料（蓝色），反应结束后取5 µl反应产物直接进行琼脂糖
凝胶电泳检测，无需再使用上样缓冲液。
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