兔/鼠通用型Streptavidin-HRP试剂盒说明书

    SPRabbit&MouseHRPKit

    Cat.No.K0120

    保存：2-8℃

    组分说明

                                   Cat.No.                        K0120     K0120A

                                    KitSize                          3ml       18ml

内源性过氧化物酶封闭液（试剂1，白色液体）                         3ml       18ml

封闭用正常羊血清工作液（试剂2，白色液体）                        3ml       18ml

生物素标记羊抗兔/鼠二抗工作液（试剂3，黄色液体）        3ml       18ml

HRP标记的链霉亲和素（试剂4，红色液体）                            3ml       18ml

*本试剂盒仅适用于一抗为兔源或鼠源抗体的IHC实验

    产品简介

      本试剂盒根据生物素(Biotin)与链霉亲和素(Streptavidin)具有很强亲和力的原理设计。在兔源或鼠源的一抗与相应的靶抗原结合后，本试剂盒中的生物素化抗·兔/鼠通用型二抗与一抗特异结合；二抗上标记的生物素与标记了过氧化物酶（HRP）的链霉亲和素结合，形成抗原～特异性一抗～生物素化的二抗～HRP标记的链霉亲和素复合物。HRP可以催化底物显色，从而推断待检抗原的存在及分布。该试剂盒使用的生物素化二抗、SA-HRP，均采用优化的标记和纯化技术，使得其染色有更高灵敏度和更低的背景，适合于检测福尔马林固定石蜡包埋组织切片，以及冰冻切片、细胞爬片、新鲜制备的血涂片等。兔/鼠通用型Streptavidin-HRP试剂盒适合与上海研谨生物即用型或浓缩型抗体配套使用。试剂盒不包括酶底物显色剂，请另行购买与过氧化酶适配的DAB或AEC显色系统。

    注意事项

 1. 以每张切片加入1滴（约50μl）计算，3ml可做60张切片，18ml可做360张切片。

2.对于内源性生物素含量比较丰富的组织，使用本试剂盒时建议用内源性生物素阻断剂进行封闭。

3.实验过程中避免组织片干燥，因此各步孵育时工作液用量必需充足，保证*覆盖组织样本，且尽量在湿盒中进行孵育。

4.为获得Z佳实验结果，请务必优化实验条件及试剂用量。

5.  本产品仅用于科研，不能用于人体反应或人体治疗。  

使用方法

1.  常规处理欲检测的石蜡或冰冻组织切片或细胞爬片等样本。

1）组织切片或细胞爬片染色前处理：

a.石蜡切片

脱蜡水化：60ºC烤片1小时，二甲苯脱蜡二次，每次5分钟；再依次浸入梯度乙醇（无水乙醇－无水乙醇－95%－85%－75%乙醇）和蒸馏水中各5分钟水化。

 b.冰冻切片和细胞爬片

切片（或爬片）浸于0.01MpH7.4PBS洗涤3次×5分钟。然后用0.1%TritonX-100覆盖组织（或细胞）浸润15分钟，0.01MpH7.4PBS洗涤2次×5分钟。

 2）石蜡切片的抗原修复：绝大大多数情况下，石蜡组织切片用柠檬酸缓冲液高压修复都是适合的。修复工作液配制：1L去离子水中加入10ml柠檬酸缓冲液（IHC抗原修复液,100×)（Cat#：K0128），混匀即可。修复过程：修复液加入高压锅内，待修复切片浸于修复液中（必需没过组织），盖上压力锅盖，加热至均匀喷汽，

 从喷汽开始计时，1~2分钟后压力锅离开热源，自然冷却至室温，取出切片，蒸馏水淋洗后，再用PBS（0.01MpH7.4）漂洗2次，每次3分钟。

 2.  滴加适量试剂1（内源性过氧化物酶封闭液），室温孵育10分钟，PBS充分淋洗。

3.  滴加适量试剂2（封闭用正常羊血清工作液），室温孵育10分钟，甩干。

4.  滴加适量一抗工作液（商品化即用型抗体或适当比例稀释的浓缩抗体），按实验要求孵育，然后PBS充分淋洗。

5.  滴加适量试剂3（生物素标记羊抗兔/鼠二抗工作液），室温孵育10分钟，PBS充分淋洗。

6.  滴加适量试剂4（HRP标记的链霉亲和素），室温孵育10分钟，PBS充分淋洗。

7.  滴加显色工作液显色（DAB或AEC）。

8.  复染，脱水透明，封片。

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