蔗糖磷酸合成酶（Sucrose phosphate synthase，SPS）试剂盒说明书

微量法

正式测定管前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定

测定意义

蔗糖不仅是重要的光合产物，也是植物体内运输的主要物质，还是碳水化合物的贮存形式之一。SPS（EC 2.4.1.14）以果糖-6-磷酸为受体，形成的蔗糖磷酸在蔗糖磷酸酶的作用下形成蔗糖。一般把蔗糖磷酸酯合成酶-蔗糖磷酸酶系统看作是蔗糖合成的主要途径。

测定原理

蔗糖磷酸合成酶催化果糖-6-磷酸形成蔗糖磷酸，蔗糖磷酸与间苯二酚反应可呈现颜色变化，在480nm下有特征吸收峰，酶活力大小与颜色的深浅成正比。

需自备的的仪器和用品

可见分光光度计/酶标仪、水浴锅、离心机、移液器、微量石英比色皿/96孔板、研钵、冰

试剂的组成和配制

提取液：液体 100mL×1 瓶，4℃保存；

试剂一：液体 2.5mL×1 瓶，-20℃保存；

试剂二：1000μg/mL 蔗糖溶液 10mL×1 瓶，4℃保存；

试剂三：液体 2mL×1 瓶，4℃保存

试剂四：液体 25mL×1 瓶，4℃保存；

试剂五：液体 6mL×1 瓶，4℃保存；

样品测定的准备：

按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL提取液），进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。

测定步骤

1、分光光度计或酶标仪预热30min以上，调节波长至480nm，蒸馏水调零。

2、样本测定（在 EP 管中依次加入下列试剂）：

混匀，沸水浴30min，冷却后，取200μL至微量石英比色皿或96孔板中，480nm下测定各管吸光值。标准管和空白管只要做一管。每个测定管需要设一个对照管。

SPS 活力单位的计算

1、按照蛋白浓度计算

单位定义：每mg组织蛋白每分钟催化产生1μg蔗糖定义为一个酶活力单位。

SPS 活性(μg /min/mg prot)= {C 标准管×V1×（A 测定管-A 对照管)÷（A 标准管-A 空白管)）÷(V1×Cpr)÷T=100×（A 测定管-A 对照管)÷（A 标准管-A 空白管)÷Cpr

2、按照样本鲜重计算

单位定义：每g组织每分钟催化产生1μg蔗糖定义为一个酶活力单位。

SPS 活性(μg /min/g 鲜重) = {C 标准管×V1×（A 测定管-A 对照管)÷（A 标准管-A 空白管)）÷(W×V1÷V2)÷T=100×（A 测定管-A 对照管)÷（A 标准管-A 空白管)÷W

C 标准管：标准管浓度，1000μg/mL；V1：加入反应体系中样本体积，0.01mL； V2：加入提取液体积，1mL；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本鲜重，g；T ：反应时间：10min。

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