土壤N-乙酰-β-D-葡萄糖苷酶（Solid-N-acetyl-β-D-glucosidase,

S-NAG）试剂盒说明书

分光光度法 50 管/24 样

正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定测定意义：

S-NAG 是溶酶体中的一种酸性水解酶，由土壤微生物分泌。S-NAG 活性变化与机体某些病理状态密切相关。

测定原理：

S-NAG 分解 β-N-乙酰氨基葡萄糖苷生成对-硝基苯酚，后者在 400nm 有最大吸收峰，通过测定吸光值升高速率来计算NAG 活性。

自备用品：

可见分光光度计、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、1mL 玻璃比色皿、甲苯（不允许快递）和蒸馏水。

试剂组成和配制：

试剂一：甲苯 5mL×1 瓶，4℃保存；（自备）

试剂二：粉剂×2 瓶，-20℃保存；临用前每瓶加入 6mL 蒸馏水，充分溶解备用，用不完的试剂仍-20℃保存；

试剂三：液体 25mL×1 瓶，4℃保存； 试剂四：液体 50mL×1 瓶，4℃保存； 样品处理：

新鲜土样自然风干或 37 度烘箱风干，过 30~50 目筛。

测定步骤：

混匀， 37℃振荡反应 1h 后，立即 90℃水浴 5min（盖紧，防止水分散失），流水冷却 10000g 25℃离心 10min，取上清液

充分混匀，室温静置 2min 后，400nm 处蒸馏水调零，测定吸光值 A，计算 ΔA=A 测定管-A 对照管。每个测定管设一个对照管。

S-NAG 活力计算：

标准条件下测定的回归方程为 y = 0.00645x -0.0054；x 为标准品浓度（μmol/L），y 为吸光值。单位的定义：每天每 g 土样中产生 1 μmol 对-硝基苯酚定义为一个酶活力单位。

S-NAG 活力（μmol/d/g 土样）＝ (ΔA+0.0054) ÷0.00645×V 反总÷W÷T =68.84×(ΔA+0.0054)

T：反应时间，1h=1/24d； V 反总：反应体系总体积：9.25×10-4 L；W：样本质量，0.05g。