羟自由基清除能力测定试剂盒说明书

可见分光光度法

注意：正式测定之前选择 2-3个预期差异大的样本做预测定。

测定意义

羟自由基作用于体内蛋白质、核酸、脂类等生物分子，造成细胞结构和功能受损，进而导致体内代谢紊乱引起疾病。羟自由基清除能力是样品抗氧化能力的重要指标之一，在抗氧化类

保健品和药品研究中得到广泛应用。

测定原理

H₂O₂/ Fe²⁺通过Fenton 反应产生羟自由基，将邻二氮菲- Fe²⁺水溶液中 Fe²⁺氧化为Fe³⁺，导致 536nm吸光度下降，样品对536nm吸光度下降速率的抑制程度，反映了样品清除羟自由基的能力。

自备实验用品

可见分光光度计、恒温水浴锅、1mL 玻璃比色皿和蒸馏水。

试剂组成和配制

提取液：液体 50 mL×1 瓶，4℃保存。

试剂一：液体 8 mL×1 瓶，4℃避光保存。

试剂二：液体 20 mL×1 瓶，4℃保存。

试剂三：液体 5 mL×1 瓶，4℃保存。

试剂四：液体 5 mL×1 瓶，4℃保存。

样品的制备

1. 组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，

加入1mL提取液）进行冰浴匀浆，然后 10000g，4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。

2. 血清、果汁等液体样品可直接测定。

3. 提取物（或者药物）可配制成一定浓度，如 5 mg/mL。

操作步骤

注意：空白管和标准管只需测定一次。

计算公式

羟自由基清除率 D% =（OD测定管- OD对照管）÷（OD空白管-OD对照管）×100%

注意事项

为了比较不同样品羟自由基清除能力，对于同一批样品必须加入等量的样品，血清、组织匀浆、果汁等液体样品加入同样体积，提取物（或者药物）配制成同样浓度。

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