BCA法蛋白含量测定试剂盒说明书 

微量法

注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定，确保蛋白浓度在20-2000μg/ml内。

货号：YX-W-C202

规格：100T/96S

产品内容：

试剂A：液体×1瓶，4℃保存。 

试剂B：液体×1支，4℃保存。 

标准品：液体×1支，4℃保存。 

产品说明：

样品可溶性蛋白质含量常常用于酶活性计算。此外，可溶性蛋白质含量也用于食品等质量分析。 测定原理： 碱性条件下，蛋白质中半胱氨酸、胱氨酸、色氨酸、酪氨酸以及肽键，能将Cu2+还原成Cu+；2分子的BCA与Cu+结合，生成紫色络合物，在540-595nm有吸收峰，562nm处吸收峰ZUI强。 自备仪器和用品： 

台式离心机、恒温水浴锅、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板、移液器和蒸馏水。 

工作液配制：临用前请根据拟用工作液体积（样本数×0.2mL），将试剂A和B按照50：1的比例混合，盖紧后充分混匀。 

操作步骤：

一、样品中可溶性蛋白质提取： 

1. 液体样品：澄清液体样品可以直接测定。 

2. 组织样品：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL提取液（自备，根据需要选用酶提取缓冲液或者蒸馏水或者生理盐水），冰浴匀浆，10000rpm，4℃离心10min，取上清，即待测液。（动物样品常常需要稀释） 

3. 细菌、真菌：按照细胞数量（10⁴个）：提取液体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细胞加入1mL提取液），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3秒，间隔7秒，总时间3min）；然后10000rpm，4℃，离心10min，取上清置于冰上待测。 

二、测定操作： 

1. 可见分光光度计/酶标仪预热30min，调节波长到562 nm，蒸馏水调零。

• 工作液置于60℃水浴预热30 min。

注意：空白管和标准管只需要做一次。 

三、计算公式： 

Cpr (mg/mL)= C标准品×（A测定管－A空白管）÷（A标准管－A空白管） 

=0.5×（A测定管－A空白管）÷（A标准管－A空白管）

注意事项：

• BCA 法蛋白含量测定试剂盒，适用于测定蛋白浓度在20-2000μg/ml 样品。测定前取1-2 个样做预实验，样品蛋白含量太高的话，请稀释至相应浓度范围内，以确保测定的准确性。 
• 待测样品蛋白提取可用生理盐水、蒸馏水或PBS 提取。 
• 由于受测定温度及时间等的影响，请严格按照给定条件测定。

本产品仅供科学研究使用！请勿用于临床、诊断、食品、化妆品检测等用途！

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