TMD8 人弥漫大B淋巴瘤细胞

Product Format: a 15 ml centrifuge tube

Culture Properties：悬浮

Complete Growth Medium: 89%1640+10%FBS+1%双抗

Atmosphere: air, 95%; carbon dioxide (CO2), 5%

Application:  Cells and cancer research

NOTE: FOR RESEARCH USE ONLY.

Components  

Operation steps for cell culture

• 轻轻吹匀细胞，收集悬液1000rpm(150g左右)离心3min，弃上清；
• 用新的*培养基重悬细胞，均匀分为几份，接种到新的培养瓶中，并补加足量的*培养基；

（悬浮细胞比较依赖细胞密度，细胞传代前及传代后密度不宜过低，过低可能会导致细胞生长缓慢或者死亡。细胞传代前培养基不能*变黄，不然细胞状态变差会导致传代失败。传代过程吹打细胞应尽量轻柔，不应吹出过多气泡。）

• 将细胞放回37度培养箱继续培养。

传代比例: 不同细胞生长速度不一，具体传代比例视细胞生长速度而定，大部分细胞适用1:3-1:4传代，生长较慢的细胞可以1:2传代。

Cell cryopreservation

• 冻存液：92%*培养基+8%DMSO（可以根据实验室条件自行选择）
• 降温步骤：4度10min，-20度2h，-80过夜后液氮保存。

Tips：

• 细胞经过运输后，部分细胞由于温度变化及剧烈碰撞si亡破碎形成碎片，是正常现象。贴壁细胞可以消化，悬浮细胞直接混匀收集细胞，900-1000rpm(约150g)离心3min，弃上清。加5ml PBS重悬细胞，再900-1000rpm(约150g)离心3min，用新鲜的*培养基重悬接种到新的培养瓶。第二次PBS重悬是为了去除碎片，如果平时碎片比较少，传代时可以省略PBS重悬的步骤；如果碎片很多，建议PBS多洗几次。
• 细胞生长不均时，可以将细胞消化吹散后加入新的培养基重新接种或传代。
• 细胞生长缓慢时，可以选择提高血清浓度培养（不超过20%），也可以根据细胞生长状态，选择传代细胞到新的培养瓶中继续培养。

不同细胞贴壁性差异比较大，所以消化时间差别较大，20s-10min均有可能，具体以细胞消化到相互分离但未脱落，并可以轻轻吹下为准，严禁消化到细胞*漂浮。

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