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英文名： Sephadex G-25

别名： 交联葡聚糖凝胶G-25

CAS号： 9041-35-4

此说明仅限参考

葡聚糖凝胶 G 系列使用说明

1化学和物理性质

  葡聚糖凝胶是一种珠状的凝胶，含有大量的羟基，很容易在水中和电解质溶液中溶胀。亲水基质使其非特异性吸附最小化，并在生物分子分离期间得到较高的回收率。G 型的葡聚糖凝胶有各种不同的交联度，因此它们的溶胀度和分级分离范围也有所不同。葡聚糖凝胶的溶胀度基本上不因盐和洗涤剂的存在而受影响。

葡聚糖凝胶有不同的粒度。超细级的葡聚糖凝胶是用于需要*分辨率的柱色谱和薄层色谱。粗级和中级的凝胶用于制备性色谱过程，可在较低的压力下获得较高的流速。另外， 粗级也可用于批量工艺。

2产品说明

产 品 名 称 分离范围（球蛋白） 应 用

葡聚糖凝胶 G-10 <700 缓冲液交换、脱盐，分离小分子，去除小分子

葡聚糖凝胶 G-15 <1500 缓冲液交换、脱盐，分离小分子，去除小分子

葡聚糖凝胶 G-25 1000-5000 工业上脱盐及交换缓冲液

葡聚糖凝胶 G-50 1000-30000 多肽分离、脱盐、清洗生物提取液、分子量测定

葡聚糖凝胶 G-75 2000-70000 蛋白分离纯化、分子量测定、平衡常数测定

葡聚糖凝胶 G-100 2000-120000 蛋白分离纯化、分子量测定、平衡常数测定

葡聚糖凝胶 G-150 5000-300000 蛋白分离纯化、分子量测定、平衡常数测定

葡聚糖凝胶 G-200 5000-600000 蛋白分离纯化、分子量测定、平衡常数测定

3使用方法

葡聚糖凝胶 G 系列产品以干粉形式存在，使用前必须溶胀，在膨胀期间应避免过度搅拌，因为它可能破坏填料，不要使用磁力搅拌器。

3.1填料的准备

（1）将填料在过量去离子水或缓冲液中，室温条件下膨胀 3 小时，或用热水膨胀 1 小时。洗脱缓冲液不应含有高粘度的试剂。溶胀过程中，如果上层有碎胶，请去除。

（2）将溶胀好的填料，所有的缓冲液等材料平衡至实验操作温度。

3.2装柱

（1）检查层析柱所有部件，特别是过滤网，密封圈，螺旋塞是否紧密，玻璃管是否干净和完整。

（2）将柱内及柱子底端用水或缓冲液润湿并保持一小段液位（液面略高于滤膜），务 必使底端无气泡。

（3）用玻璃棒引导匀浆沿着柱内壁一次性倒入柱内，注意勿使产生气泡。打开柱子出液口，使凝胶在柱内自由沉降，连结好柱子顶端柱头。

（4）打开蠕动泵，让缓冲液用使用时流速的 1.33 倍的流速流过，使柱床稳定（注意压力不要超过填料最大耐压）。

3.3平衡

上样前平衡层析柱至少 5-10 个柱体积直到记录仪基线变得平稳为止（流出液的 PH 值和等电点等于上柱的Buffer 的PH 值和等电点）。

3.4上样

样品一定要离心或过滤后（0.45um）上样。

凝胶过滤的上样量一般为不大于 5%的柱床体积，我们建议初次上样控制在1-2%的柱床体积，视分离情况可以调整；脱盐时上样量可以达到 20%的柱床体积，柱高的选择也与分离要求相关，柱高过高的凝胶层会引起较大的反压，应当尽可能避免。难分离物质要有一定柱高和流速控制，脱盐时高径比为 5：1 即可。

3.5洗脱方法

可以用无盐水，也可以采用上柱时的缓冲液洗脱；在上柱 Buffer 中加入 NaCl 等梯度洗脱或盐梯度洗脱也可以*分离纯化。

3.8 在位清洗（CIP）

凝胶使用十次后作一次 CIP，目的是去除柱床内沉淀的及顽固残留的蛋白。方法是以40cm/h 用 0.1 M 氢氧化钠洗四个柱体积，再以至少三个柱体积平衡缓冲液再生。

注意事项：

1.上样之前，样品必须经过膜过滤及去除色素，否则杂质及色素会被吸附到填料上，影响填料的正常使用。

2.在使用过程中，避免使用高浓度的强酸强碱，酸和碱的浓度应低于 0.15 摩尔。碱会使流速变慢。

3.不同的样品，吸附和洗脱方法不相同，可以根据相关的文献进行。